... vše o fyzikálním praktiku najdete právě na těchto stránkách
UK • MFF • KVOF
Zde můžete vidět rozdíly mezi vybranou verzí a aktuální verzí dané stránky.
Obě strany předchozí revize Předchozí verze Následující verze | Předchozí verze Následující verze Obě strany příští revize | ||
zadani:335 [27.01.2023 10:26] Kudrnová Hana Mgr. |
zadani:335 [12.01.2024 10:38] Kudrnová Hana Mgr. |
||
---|---|---|---|
Řádek 1: | Řádek 1: | ||
====== (35) Fluorescenční mikroskop ====== | ====== (35) Fluorescenční mikroskop ====== | ||
- | Pracovní úkoly budou zveřejněny později. | + | {{:zadani:texty:txt_335.pdf|Studijní text}} |
- | **O úlohu se student může zajímat až po absolvování nejméně poloviny běžných úloh. Pro stanovení termínu měření a zápis na úlohu je třeba včasná předchozí domluva s vedoucí praktika.** | + | ===== Pracovní úkol ===== |
+ | |||
+ | |||
+ | - Osvojte si ovládání fluorescenčního mikroskopu pozorováním názorného vzorku. | ||
+ | - Srovnejte okem zobrazení v transmisi a v emisi, diskutujte rozdíly. | ||
+ | - Nastavte parametry snímání kamerou, aby barvy a intenzity odpovídaly pozorování okem v okuláru. Uložte snímek vzorku. Popište do protokolu. | ||
+ | - S použitím sub-difrakčně malých fluorescenčních kuliček změřte bodovou rozptylovou funkci mikroskopu. | ||
+ | - Připravte vzorek A, nalezněte kuličky, zobrazte v emisi a transmisi. Diskutujte výhodu fluorescenčního pozorování na tmavém pozadí. | ||
+ | - Proměřte 3D prostorovou závislost bodové rozptylové funkce (PSF) určené z emise jednotlivých kuliček. Změřte 11 xy řezů pro vzdálenosti od ohniska (z v oblasti cca -10 m až +10 m). | ||
+ | - Měřením vzdálenosti v měřícím programu zkalibrujte obraz (vzdálenost na pixel). | ||
+ | - Přímo v praktiku analyzujte pomocí programu ImageJ PSF ve třech rovinách z (z<0, z=0, z>0), vykreslete. | ||
+ | - Určete rozlišení Rayleighovým kritériem. Srovnejte s teoretickou hodnotou pro známou emisní délku barviva Nile Red 660 nm a numerickou aperturu použitého objektivu. | ||
+ | - Použijte mikroskop k měření nanometrových vzdáleností metodou FRET. | ||
+ | |||
+ | |||
+ | **O úlohu se student může zajímat až po absolvování nejméně poloviny běžných úloh.** | ||
+ | Pro stanovení termínu měření a zápis na úlohu je třeba včasná **předchozí domluva s vedoucí praktika**. | ||
+ | |||
+ | **Základní vztahy a~klíčová slova:** | ||
+ | |||
+ | Fluorescence, rozlišení fluorescenční mikroskopie, difrakční limit, bodová zobrazovací funkce | ||
+ | |||
+ | **{{:zadani:pokyny:mereni_335.pdf|Pokyny k měření}}** | ||