... vše o fyzikálním praktiku najdete právě na těchto stránkách
UK • MFF • KVOF
Zde můžete vidět rozdíly mezi vybranou verzí a aktuální verzí dané stránky.
Obě strany předchozí revize Předchozí verze Následující verze | Předchozí verze | ||
zadani:334 [20.01.2022 11:10] Kudrnová Hana Mgr. |
zadani:334 [13.03.2023 14:10] (aktuální) Kudrnová Hana Mgr. [Pracovní úkol] |
||
---|---|---|---|
Řádek 10: | Řádek 10: | ||
===== Pracovní úkol ===== | ===== Pracovní úkol ===== | ||
- | - Připravte vzorek fluorescenčního barviva (odvážením a rozpuštěním ve vodě). | + | - Změřte transmisní spektrum připraveného vzorku rhodaminu B ve skleněné kyvetě ve srovnání s čistým rozpouštědlem – etanolem. Excitační monochromátor nastavte na nultý řád (kolem 2 nm), aby procházelo celé spektrum excitační LED. |
- | - Vláknovým spektrometrem změřte emisní spektrum LED zdroje světla v transmisním uspořádání. | + | - Proměřte spektra LED po filtrování excitačním monochromátorem v rozsahu 442–580 nm s krokem 6 nm (transmisní uspořádání s kyvetou etanolu). Poté využijte stejné vlnové délky pro excitaci fluorescence rhodaminu B (světlovod musí být přendán z transmisního uspořádání na uspořádání v pravém úhlu). |
- | - Změřte absorpční spektrum připraveného vzorku. Určete rozsah vlnových délek, které použijete pro excitaci fluorescence. | + | - Detekční světlovod přendejte na příslušný port integrační koule. Zapněte excitační LED, proud nastavte na 10 mA a nechte ustálit nejméně 10 min. Změřte postupně spektra při umístění kyvet na držák v integrační kouli: etanol (reference), rhodamin B, prázdná plastová kyveta (reference), kyveta s proužky luminoforu z bílého LED světla. Každou dvojici porovnávaných vzorků můžete měřit vícekrát pro posouzení stability a reprodukovatelnosti výsledku. |
- | - Mezi světelný zdroj a světlovod vložte ručně nastavitelný monochromátor a v transmisním uspořádání změřte intenzitu světla vystupujícího z monochromátoru ve spektrálním rozsahu odpovídajícím rozsahu vlnových délek použitých pro excitaci fluorescence (po 10 nm). | + | - (data z úkolu 1) Využitím Lambertova - Beerova zákona převeďte transmisní spektrum na absorpční koeficient //κ// [cm<sup>-1</sup>] a z jeho hodnoty v maximu absorpčního píku odhadněte koncentraci //c// rhodaminu B s využitím hodnoty molárního absorpčního koeficientu //ε// = 1,1 × 10<sup>3</sup> L·mol<sup>-1</sup>·cm<sup>-1</sup> (při použití dekadického logaritmu). |
- | - Uspořádání spektrometru změňte na detekci pod pravým úhlem a změřte intenzitu fluorescence vzorku pro celý rozsah excitačních vlnových délek (tak zvaná excitačně emisní matice). Naměřené hodnoty intenzity fluorescence korigujte o temný signál spektrofotometru, normalizujte na intenzitu excitace a vyneste do 3D grafu. | + | - (data z úkolu 2) Zpracujte excitační spektrum (integrované emisní spektrum vydělené integrovaným excitačním píkem). |
- | - Z excitačně emisní matice vyberte data odpovídající synchronně skenovacímu fluorescenčnímu (SSF) spektru s Δλ = 60 nm. | + | - (data z úkolů 1 a 2) Vyneste vhodně normované absorpční, excitační a emisní spektrum (pro excitaci např. 502 nm) do jednoho grafu. Určete Stokesův posun mezi píkem absorpce a emise. |
+ | - (data z úkolu 3) Spočítejte kvantovou a výkonovou účinnost rhodaminu B a luminoforu. | ||
+ | |||
+ | | ||
Řádek 24: | Řádek 27: | ||
** Základní vztahy a klíčová slova: ** | ** Základní vztahy a klíčová slova: ** | ||
- | Fluorescence, fosforescence, Stokesův posun, fluorescenční barviva | + | Fluorescence, fotoluminiscence, Stokesův posun, fluorescenční barvivo, luminofor, účinnost |
**{{:zadani:pokyny:mereni_334.pdf|Pokyny k měření}}** | **{{:zadani:pokyny:mereni_334.pdf|Pokyny k měření}}** | ||
+ | |||
+ | **{{:zadani:pokyny:uloha34fluocitlivost.xlsx|Kalibrační křivka citlivosti systému s integrační koulí}}** | ||